机器视觉（AOI)之数字PCR（dPCR）
数字PCR是第三代PCR技术，是一种核酸分子绝对定量技术。与传统qPCR技术相比，数字PCR(dPCR)具有：绝对定量、无需标准品、样品需求低，高灵敏度，高耐受性等特点。数字PCR一般包括两部分内容，即PCR扩增和荧光信号分析。在PCR 扩增阶段，数字PCR一般需要将样品稀释到单分子水平，并平均分配到几十至几万个单元中进行反应，通过特定激光来激发出通道中的荧光信号。在扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析，最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。相对于qPCR技术，dPCR技术具备以下优势：（1）灵敏度可达单个核酸分子：检测限低至0.001%；（2）无需标准品/标准曲线，即可对靶分子起始量进行绝对定量；（3）特别适合基质复杂样品的检测；（4）能够有效区分浓度差异（变化）微小的样品，有更好的准确度、精密度和重复性。目前，数字PCR技术在病原体检测、癌症生物标志物研究和拷贝数变异分析、基因表达分析、环境监测、食品检测等领域得到广泛应用。常见的数字PCR(dPCR)技术主要有两种：微滴式dPCR(ddPCR)和芯片式dPCR(cdPCR)。两者基本原理相同，由于芯片式dPCR制造芯片的成本较高，目前微滴式dPCR以更低成本、更实用的优势，正越来越受到企业的认可。微滴式dPCR(ddPCR)也在此次疫情防控中有力推动了对疑似疫情感染患者的甄别工作。主要组成：荧光通道、激光器、光学检测器、数据采集系统等。激光器选择：高功率稳定性，光斑高斯分布。常用波长：405nm，473nm，532nm，639nm等。
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